产品货号：
BTN180703
中文名称：
可视化LAMP扩增试剂盒(防污染)
英文名称：
Visual UNG-LAMP Kit
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本试剂盒含有可视化UNG-LAMP扩增所需的所有成分，可以用于可视化UNG-LAMP等温扩增。
LAMP即Loop-Mediated Isothermal Amplification（环介导等温扩增），它利用4条模板专一的特异引物和具有链置换能力的Bst DNA聚合酶，在等温条件下(63℃左右) 30～60分钟完成扩增。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于定性PCR技术，同时还不需要昂贵的仪器设备。目前已成功应用于生物的快速检测，广泛用于各个领域。
保存：-20℃，有效期1年。
本试剂盒足够50次20μL体系的UNG-LAMP扩增。
LAMP模板、LAMP引物
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LAMP即Loop-Mediated Isothermal Amplification（环介导等温扩增），它利用4条模板专一的特异引物和具有链置换能力的Bst DNA聚合酶，在等温条件下(63℃左右) 30～60分钟完成扩增。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于定性PCR技术，同时还不需要昂贵的仪器设备。目前已成功应用于生物的快速检测，广泛用于各个领域。
- 即开即用，含有可视化染料和UNG，扩增后可以直接肉眼观察，不需要仪器设备。同时有UNG-dUTP防污染系统。
- 高特异性，精心优化的配方，非特异扩增比自配的试剂更低。
- 4×MasterMix，比对应的2×MasterMix可使用更多的扩增模板。最多可达11μL，降低漏检的机率。
- 高扩增效率，一般比PCR灵敏一个数量级。
- 65℃左右等温扩增，不需要贵重仪器。
- 提供扩增对照，便于在遇到困难时分析原因。
- 本制品只能用于科研，不能用于临床。
| 组分 | 规格 |
| 4×UNG-LAMP MasterMix(含可视化染料) | 200μL |
| Bst DNA聚合酶-UNG | 50μL |
| 阳性对照模板-引物混合物 | 50μL |
保存：-20℃，有效期1年。
本试剂盒足够50次20μL体系的UNG-LAMP扩增。
LAMP模板、LAMP引物
- 引物设计对成功扩增十分关键，尽量以保守区设计引物。
- 引物至少包括F3/B3和FIP/BIP，加入环状引物F loop/B loop可以使反应速度大大提高。
- 应优化引物序列、GC含量和尽量避免二级结构。
- LAMP扩增具有特异性好、灵敏度高、时间快、不需要特殊仪器设备等优点。但太高的灵敏度使得其比普通PCR扩增更加容易污染导致假阳性。因此，必须高度重视扩增产物的污染。常规措施包括严格的实验分区、使用荧光定量等不开盖检测方法。实验室一旦遭到污染，很难去除，最好重新设计引物扩增新的靶片段。
- 制备模板DNA：用于选用合适的方法制备模板DNA。如果有N个样品，最好设置N+2个样品制备，多出的两个一个是样品制备阳性对照，一个是样品制备阴性对照。
- 配制5×LAMP引物混合液。
先加超纯水将自备的HPLC级别的下列引物干粉稀释到下表所标注的母液浓度，然后在一新的离心管中按表中所列体积加入各种引物母液和超纯水，最后得到1mL的5×LAMP引物混合液，此混合液足够250次20μL体系的LAMP扩增。如果需要配制的5×LAMP引物混合液体积异于1mL，则各成分的用量请按比例调整。引物混合液可以在-20℃放置2年。
注：如果没有Loop引物，则用水替代。引物名称 母液浓度 加母液量 在5×LAMP引物混合液中的浓度 FIP引物 100μM 80μL 8μM BIP引物 100μM 80μL 8μM F3引物 100μM 10μL 1μM B3引物 100μM 10μL 1μM Loop F 100μM 20μL 2μM Loop B 100μM 20μL 2μM 超纯水 - 780μL - 终体积 - 1mL - - 在冰上融化4×UNG-LAMP MasterMix（含可视化染料），混匀，稍离心。第一次使用时，请将50μL Bst DNA聚合酶-UNG全部加入到4×UNG-LAMP MasterMix中轻柔混匀，然后再使用。对N+2个样品，则在N+4个反应管中加入以下组份，多出的一管是LAMP扩增阳性对照（PC），一管是LAMP扩增阴性对照（NC）：
成分 N+2个样品管 LAMP扩增PC LAMP扩增NC 4×UNG-LAMP MasterMix
（含可视化染料，加酶后）5μL 5μL 5μL 自备5×LAMP引物混合液 4μL 不加 4μL 阳性对照模板-引物混合物 不加 4μL 不加 自备模板DNA 1～11μL 不加 不加 自备超纯水 至20μL 20μL 20μL - 混匀，置于65℃保温60分钟。如果是在PCR仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴或水浴保温，没有热盖，必须覆盖50μL的石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，严重影响反应效率。
- 扩增结束后肉眼观察结果判断阴性和阳性。典型的结果见下图：左边管为阴性，右边两个管为阳性。
- 结果分析：如果本试剂盒提供的阳性对照-引物混合物呈现阳性而阴性对照为阴性，则实验有效。如果阳性对照-引物混合物呈现阴性，则操作有问题或者试剂盒有问题，请跟厂家联系。如果阴性对照（水作为模板）也呈现阳性，则说明LAMP样品或试剂有过去的扩增产物的污染，需要注意操作的规范性，如果不能解决，可以重新设计引物扩增新的靶片段。
- 也可以电泳检测实验结果（强烈不推荐此法，因为电泳时产生的气溶胶非常容易污染环境，使得今后用同一引物扩增时产生假阳性）：取5～10μL扩增产物和自备的上样液混合，上样，进行2～3%的琼脂糖凝胶电泳，有LAMP扩增的样品将可见LAMP特征性电泳图谱。
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